細胞凋亡檢測
服務簡介：
細胞凋亡(Apoptosis)：多細胞有機體為調控機體發(fā)育、維持內環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細胞主動性死亡過程。多細胞生物體內，某些細胞的死亡是個體發(fā)育中一個預定的，并受到嚴格程序控制的正常組成部分。不同于一般的細胞壞死(cell necrosis)。細胞凋亡是指由基因控制的細胞自主有序死亡的主動過程，涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用。針對凋亡時期不同，檢測的方法有所不同。
提供的細胞凋亡檢測技術服務包括有Annexin V/PI雙染檢測細胞早期凋亡和TUNEL法檢測細胞晚期凋亡， 可用于檢測不同類型、不同處理方式、不同時期細胞凋亡狀況及分析凋亡細胞比例。
一、流式細胞儀檢測細胞凋亡——Annexin V/PI 雙染色法
原理：在細胞凋亡早期位于細胞膜內側的磷脂酰絲氨酸（PS)遷移至細胞膜外測。磷脂結合蛋白V（Annexin V）是一種鈣依賴性的磷脂結合蛋白，它于PS具有高度的結合力。因此，Annexin V可以作為探針檢測暴露在細胞外測的磷脂酰絲氨酸。故利用對PS有高度親和力的Annexin V，將Annexin V標記上熒光素（如異硫氰酸熒光素FITC），用流式細 胞儀即可檢測凋亡細胞。細胞發(fā)生凋亡時，膜上的PS外露早于DNA斷裂發(fā)生，因此Annexin V染色法檢測早期細胞凋亡較TUNEL法更為靈敏；Annexin V染色法不需固定細胞，可避免PI染色因固定造成的細胞碎片過多及TUNEL法因固定出現的DNA片段丟失。因此，Annexin V法更加省時，簡單，結果更為可靠，是目前zui為理想的檢測細胞凋亡的方法。
二、TUNEL
原理：TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）細胞凋亡檢測試劑盒是用來檢測組織細胞在凋亡早期過程中細胞核DNA的斷裂情況。其原理是熒光素（fluorescein）標記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以連接到凋亡細胞中斷裂DNA的3’-OH末端，并與連接辣根過氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的熒光素抗體特異性結合，后者又與HRP底物二氨基聯(lián)苯胺（DAB）反應產生很強的顏色反應（呈深棕色），特異準確地定位正在凋亡的細胞，因而在光學顯微鏡下即可觀察凋亡細胞；由于正常的或正在增殖的細胞幾乎沒有DNA斷裂，因而沒有3‘-OH形成，很少能夠被染色。本試劑盒適用于組織樣本（石蠟包埋、冰凍和超薄切片）和細胞樣本（細胞涂片）在單細胞水平上的凋亡原位檢測。還可應用于抗腫瘤藥的藥效評價，以及通過雙色法確定細胞死亡類型和分化階段。
服務流程：
Annexin V/PI雙染檢測調亡（適用于細胞早期凋亡檢測）
1.細胞培養(yǎng)及接種
2.誘導細胞凋亡
3.細胞收集、計數
4.Annexin V/PI標記
5.流式細胞儀檢測
6.結果分析
TUNEL法檢測細胞凋亡（適用于細胞晚期凋亡檢測）
1.標本預處理
2.內源性過氧化物酶滅活
3.TdT酶反應
4.生物素標記
5.染色
6.封片觀察
收費標準/服務周期/提供結果：
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