結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞株開(kāi)發(fā)涉及細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染，單細(xì)胞克隆及單克隆源性驗(yàn)證，蛋白表達(dá)及結(jié)構(gòu)特征篩選及鑒定，蕞終獲得優(yōu)質(zhì)的細(xì)胞株。
 

　　結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞株廣泛用于許多重要的應(yīng)用，包括生物制品(如重組蛋白和單克隆抗體)生產(chǎn)、藥物篩選和基因功能研究。開(kāi)發(fā)結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞株的過(guò)程通常始于將所需的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至選定的宿主細(xì)胞，一般是CHO或HEK 293細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后，研究人員隨后篩選和定量分析高表達(dá)的細(xì)胞克隆。
 

　　一旦檢測(cè)到這些高產(chǎn)細(xì)胞株，便進(jìn)一步對(duì)這些細(xì)胞和其產(chǎn)生的蛋白質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證。傳統(tǒng)上用于細(xì)胞株開(kāi)發(fā)的手動(dòng)篩選方法耗時(shí)且需要大量勞力，因此對(duì)于此類(lèi)工作，存在對(duì)高通量、自動(dòng)化解決方案的巨大需求。
 

　　結(jié)腸癌耐藥細(xì)胞株穩(wěn)定整合試驗(yàn)中需要考慮的幾個(gè)關(guān)鍵因素有：
 

　　1)，外源插入片段的拷貝數(shù)。多數(shù)情況下，低拷貝甚至是單拷貝可以減少人為實(shí)驗(yàn)因素的干擾。
 

　　2)，整合的幾率，這不僅決定了穩(wěn)定株篩選的難易程度，而且還可以幫助人們更容易得到混合穩(wěn)定株。
 

　　3)，整合位點(diǎn)的轉(zhuǎn)錄活躍度，決定了穩(wěn)定株中外源片段的表達(dá)質(zhì)量。理想的狀況是單拷貝，但轉(zhuǎn)錄活性比較高。
 

　　4)，整合后的穩(wěn)定性。不同的整合位點(diǎn)決定了外源片段在染色體中的穩(wěn)定性，有些區(qū)域易發(fā)生重組或者丟失，從而導(dǎo)致穩(wěn)定株再次丟失的情況。
 

　　5)，最好使用混合穩(wěn)定株或者獲得多個(gè)不同單克隆穩(wěn)定株。因?yàn)榉€(wěn)定整合往往伴隨這插入失活宿主內(nèi)源基因，所以實(shí)驗(yàn)時(shí)通過(guò)使用混合穩(wěn)定株，或者對(duì)多個(gè)單克隆穩(wěn)定株進(jìn)行比較，可以幫助研究人員獲得更精確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。