肝癌耐藥細胞的建立就是體外低濃度培養(yǎng)細胞,逐漸誘導(dǎo)耐藥?？墒钦麄€過程耗時長,易受污染,成功率一般。后來了解到還可以通過裸鼠荷瘤的方式，給裸鼠腹腔注射藥物逐漸誘導(dǎo)耐藥，zui后取瘤組織研碎制成細胞懸液在再培養(yǎng)幾代可得腫瘤細胞。這樣時間就縮短了很多~而且不受污染等條件限制。肝癌耐藥細胞的建立實驗是通過細胞與低劑量的藥物長期接觸，引起細胞本身生物化學(xué)過程的改變，細胞膜上出現(xiàn)Pgp(或P-170)糖蛋白，使細胞逐漸對藥物耐受。
 

　　肝癌耐藥細胞培養(yǎng)小技巧:
 

　　1.買細胞要去靠譜的地方買，比如ATCC或者然泰生物。一般上面會有針對細胞的介紹，這樣培養(yǎng)之前可以了解細胞正常生長的狀態(tài)圖、傳代、培養(yǎng)基的類型等。
 

　　2.不管是買的細胞，還是別人惠贈的細胞，剛拿到手趕緊的做兩件事：檢測是否有支原體污染;迅速擴增凍存，凍存細胞復(fù)蘇后第二天更換一次培養(yǎng)基。
 

　　3.發(fā)現(xiàn)細胞有污染迅速處理掉，特別是當(dāng)你養(yǎng)了很多種細胞時。細菌污染、真菌污染很容易發(fā)現(xiàn)，支原體污染的話，細胞會長的慢，可以買個支原體檢測的試劑盒定期檢測一下。
 

　　4.不同細胞生長周期不同。有的生長很快，比如說MDA-MB-231，傳代的時候取離心懸液的十分之一就已經(jīng)足夠了。有的又是特別慢，比如BT474，傳代是一分二，復(fù)蘇起始的時候兩周多才能長滿。這就需要要在培養(yǎng)細胞的過程中多多摸索。
 

　　5.對于嬌弱的細胞，就得細心呵護。胰酶消化不能過久，吹得時候要輕柔，離心時候也要注意轉(zhuǎn)速和時間。每天都要去看一下細胞，肉眼觀察培養(yǎng)基狀況、顯微鏡下觀察細胞生長狀況。記住，是每天。